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迷你梯度PCR儀常用的五種分析方法

更新時間:2022-03-10      點(diǎn)擊次數(shù):1061
  迷你梯度PCR儀的梯度溫度控制是一項(xiàng)可有助于PCR中引物退火優(yōu)化的功能。 梯度設(shè)定的目的是在模塊之間實(shí)現(xiàn)變化的溫度,通過每列之間≥2°C的間隔溫度升降,使得可同時對于一系列的溫度進(jìn)行測試以獲取引物退火溫度。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計帶有三個或更多分割金屬模塊的PCR儀,每一模塊都具有獨(dú)立的加熱和冷卻元件。 相比于梯度模塊,該模塊設(shè)計可帶來活設(shè)置三種或更多不同溫度的能力,以便使得每個獨(dú)立的區(qū)域都能進(jìn)行更好的溫度控制,特別是在優(yōu)化過程中。
  獨(dú)立金屬模塊的絕熱性阻止了模塊之間的熱交換。 這就可實(shí)現(xiàn)更為準(zhǔn)確的模塊溫度控制,確保模塊之間實(shí)現(xiàn)線性的溫度變化。
  迷你梯度PCR儀分析方法:
  ·凝膠電泳分析:PCR產(chǎn)物電泳,EB溴乙錠染色紫外儀下觀察,初步判斷產(chǎn)物的特異性。PCR產(chǎn)物片段的大小應(yīng)與預(yù)計的一致,特別是多重PCR,應(yīng)用多對引物,其產(chǎn)物片斷都應(yīng)符合預(yù)評的大小,這是起碼條件。
  ·瓊脂糖凝膠電泳:通常應(yīng)用1~2%的瓊脂糖凝膠,供檢測用。
  ·聚丙烯酰胺凝膠電泳:6~10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好,條帶比較集中,可用于科研及檢測分析。
  ·酶切分析:根據(jù)PCR產(chǎn)物中限制性內(nèi)切酶的位點(diǎn),用相應(yīng)的酶切、電泳分離后,獲得符合理論的片段,此法既能進(jìn)行產(chǎn)物的鑒定,又能對靶基因分型,還能進(jìn)行變異性研究。
  ·分子雜交:分子雜交是檢測PCR產(chǎn)物特異性的有力證據(jù),也是檢測PCR產(chǎn)物堿基突變的有效方法。
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